【中國觀點】
重組DNA技術
recombinant DNA technology
【摘 自】中國百科全書
【漢語拼音】chongzu DNA jishu
【中文詞條】重組DNA技術
【外文詞條】recombinant DNA technology
【作 者】王二力
知識分類:分類檢索/生物學/生物學/生物學研究方法與設施/遺傳學技術/重組DNA技術
也稱基因工程或遺傳工程。是一種於20世紀70年代在分子遺傳學﹑細胞生物學基礎上發展起來的﹐可以按照人們的設計改造和組建生物品種﹐包括進行菌種性能改良的新技術。它雖問世不久﹐但已充分顯示了它無限的生命力和深遠的發展潛力。
主要內容 此技術的基本內容是按照人們預先的設計﹐在離體的條件下﹐將一段外源(供體)脫氧核糖核酸(DNA)片斷﹐即需要的目的基因遺傳物質的基本單元(它是DNA分子上具有特殊遺傳功能的片斷)﹐與一個在宿主(受體)中能自我複製的DNA載體﹐由酶催化拼接成重組質粒﹐然後轉入受體細胞﹐並在其中能存活﹑複製﹑表達和遺傳。此技術有三個基本環節﹐即供體DNA片斷的獲得﹔載體DNA與供體DNA的體外拼接以及受體細胞接受已拼接供體DNA片斷的載體。
重組步驟 首先是通過限制性內切酶(一種能從鏈狀或環狀DNA分子中識別特異DNA片斷﹐能將該處切開﹐並產生互補末端的)切取供體中含所需基因的 DNA片斷﹐或通過反轉錄酶以外源mRNA(信息核糖核酸)為模板合成的cDNA(互補脫氧核糖核酸)作為外源基因﹔也可用人工全合成的基因與載體相連接。載體通常是質粒(細胞中染色體外的遺傳物質﹐常是環狀的DNA分子)或病毒(包括噬菌體)﹐它們都能在受體中自我複製並帶有可供篩選用的標記﹐含外源基因的DNA片斷在連接酶的作用下與已被限制性內切酶切開的載體進行共價連接(重組)。最後在鈣離子或聚乙二醇的幫助下﹐將重組的載體轉入受體細胞。與外源基因相連接的質粒被稱為重質粒或嵌合質粒﹐其中的外源基因將隨受體的繁殖或載體的擴增而大量增殖﹐這一過程稱無性繁殖或基因克隆(gene cloning)﹐所獲得的重組DNA細胞稱為克隆(clone)細胞(無性繁殖細胞)。......
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